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PCR试剂

技术概述

qPCR试剂(实时荧光定量PCR试剂)是分子生物学研究中基因表达定量、病原体检测、SNP分析的核心工具。主流技术包括S染料法(SYBR Green/TB Green)探针法(TaqMan),采用热启动Taq DNA聚合酶(Hot Start Taq)抑制非特异性扩增,扩增效率>95%,灵敏度可达50拷贝/反应,批次间CV <10%。 限制性内切酶(Restriction Enzymes)是基因克隆与载体构建的关键工具酶,识别特异性DNA序列并进行切割,常见类型包括EcoRI、BamHI、HindIII、NotI、XhoI等,广泛应用于限制性酶切图谱分析、RFLP检测、DNA片段连接。 细胞转染试剂将外源核酸(DNA/RNA)导入真核细胞,技术路线包括脂质体转染(LNP)、阳离子聚合物(PEI)、电穿孔、病毒载体(慢病毒/腺病毒),转染效率可达70%-95%,适用于基因过表达、基因敲低、CRISPR基因编辑、蛋白表达等场景。实验试剂涵盖通用缓冲液(Tris、PBS、EDTA)、染料(SYBR Green、EB、GelRed)、蛋白质(BSA、蛋白酶K)、抗体等基础研究试剂,是分子生物学、细胞生物学、生物化学、免疫学实验的基础耗材。2026年,qPCR试剂向高速反应(10秒延伸)、一步法RT-qPCR、数字PCR方向演进;转染试剂向低毒性、高效率、无血清配方发展。

核心技术优势

  • qPCR高特异性:热启动Taq酶常温下完全封闭活性,抑制低温条件下引物非特异性退火与引物二聚体形成;Tli RNaseH有效降解cDNA中残存mRNA,消除对PCR反应的阻害
  • qPCR灵敏度与重复性:灵敏度可达50拷贝/反应(与模板质量、引物设计相关);扩增效率90%-110%;批次间CV <10%,附完整CoA检测报告
  • qPCR兼容性:2X Master Mix即用型配方,兼容主流荧光定量PCR仪(Applied Biosystems、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler、Eppendorf);支持SYBR Green与TaqMan探针双通道检测
  • 限制性内切酶高活性:酶活性单位≥10,000 U/mL;星号活性低(高甘油浓度下仍保持特异性);支持热灭活(65°C/80°C 20min),便于后续连接反应
  • 限制性内切酶多样性:覆盖200+种限制性内切酶,识别4-8bp特异性序列;提供同裂酶、同尾酶、甲基化敏感酶等全系列工具酶
  • 细胞转染高效率:脂质体转染效率70%-95%;阳离子聚合物(PEI)适用于悬浮细胞与大规模转染;电穿孔适用于难转染细胞(原代细胞、干细胞)
  • 细胞转染低毒性:新一代转染试剂采用无血清配方,细胞毒性低,转染后细胞存活率>90%;支持DNA、mRNA、siRNA、CRISPR Cas9 RNP等多种核酸类型
  • 实验试剂高纯度:分子生物学级(Molecular Biology Grade)、无DNase/RNase、无内毒素;pH值精确控制(±0.1);批次间稳定性好

产品类型对比

产品类别 核心技术 关键参数 适用场景 典型应用
S染料法qPCR试剂(SYBR Green) 嵌合荧光法 灵敏度50拷贝/反应,扩增效率>95% 基因表达定量、熔解曲线分析 相对定量、绝对定量、SNP分析
探针法qPCR试剂(TaqMan) 荧光探针法 特异性>99%,多重检测4-6通道 高特异性检测、多重qPCR 病原体检测、拷贝数变异、基因分型
一步法RT-qPCR试剂 逆转录+qPCR一管完成 反应时间 <30min,RNA输入1ng-1μg RNA病毒检测、基因表达快速分析 SARS-CoV-2检测、mRNA表达分析
高速qPCR试剂(FAST) 快速扩增酶+优化Buffer 延伸时间10秒,全程 <30min 高通量筛选、快速诊断 临床快速检测、大规模样本筛查
限制性内切酶(常用型) 特异性DNA识别与切割 活性≥10,000 U/mL,星号活性低 基因克隆、载体构建 EcoRI、BamHI、HindIII、NotI酶切
限制性内切酶(甲基化敏感型) 识别甲基化状态 区分CpG甲基化 表观遗传学研究 DNA甲基化分析、基因组印记研究
DNA连接酶(T4 DNA Ligase) 磷酸二酯键形成 连接效率>90%,支持粘性/平末端 DNA片段连接、载体构建 克隆连接、文库构建
脂质体转染试剂 脂质纳米颗粒(LNP) 转染效率70%-95%,细胞毒性低 贴壁细胞、悬浮细胞 基因过表达、siRNA敲低、CRISPR编辑
阳离子聚合物转染试剂(PEI) 聚合物压缩核酸 适用于悬浮细胞,可规模化 悬浮细胞、大规模转染 蛋白表达、病毒包装
电穿孔转染 电场瞬时穿孔 适用于难转染细胞,效率>80% 原代细胞、干细胞、免疫细胞 CAR-T细胞制备、基因编辑
通用缓冲液(Tris/PBS/EDTA) pH缓冲与离子平衡 pH精确控制(±0.1),无DNase/RNase 分子生物学、细胞培养 核酸提取、蛋白纯化、细胞洗涤
核酸染料(SYBR Green/GelRed/EB) 嵌入双链DNA发光 灵敏度0.1-1ng DNA/条带 凝胶电泳检测 PCR产物检测、DNA定量
蛋白质试剂(BSA/蛋白酶K) 标准蛋白/蛋白水解酶 BSA纯度>98%;蛋白酶K活性>30 U/mg 蛋白定量、核酸提取 Bradford定量、DNA提取去蛋白


应用场景

  • 基因表达分析:qPCR定量mRNA表达水平,研究基因调控网络、药物作用机制、疾病标志物筛选
  • 病原体检测与诊断:qPCR检测病毒(SARS-CoV-2、HIV、HBV)、细菌、真菌核酸,临床诊断与流行病学调查
  • 基因克隆与载体构建:限制性内切酶切割目的基因与载体,DNA连接酶连接,构建重组质粒
  • CRISPR基因编辑:转染试剂递送Cas9 mRNA/sgRNA或Cas9-sgRNA RNP复合物,实现基因敲除、敲入、点突变
  • RNA干扰与基因沉默:转染试剂递送siRNA/shRNA,实现基因表达敲低,研究基因功能
  • 蛋白表达与纯化:转染试剂递送表达载体至HEK293、CHO细胞,表达重组蛋白用于结构与功能研究
  • 表观遗传学研究:甲基化敏感限制性内切酶分析DNA甲基化状态,研究基因组印记、肿瘤表观遗传调控
  • 细胞治疗与再生医学:电穿孔转染制备CAR-T细胞、基因修饰干细胞,用于免疫治疗与组织再生

选型建议

  • 基因表达定量(常规):选择SYBR Green染料法qPCR试剂,性价比高,适用于引物特异性好的靶基因
  • 高特异性检测/多重qPCR:选择TaqMan探针法qPCR试剂,特异性>99%,支持4-6重检测
  • RNA快速检测:选择一步法RT-qPCR试剂,逆转录与qPCR一管完成,30min内出结果
  • 高通量筛选/快速诊断:选择高速qPCR试剂(FAST),延伸时间10秒,全程 <30min
  • 常规基因克隆:选择常用限制性内切酶(EcoRI、BamHI、HindIII等),配合T4 DNA连接酶
  • 甲基化分析:选择甲基化敏感限制性内切酶,区分CpG位点甲基化状态
  • 贴壁细胞转染(常规):选择脂质体转染试剂,效率70%-95%,细胞毒性低
  • 悬浮细胞/大规模转染:选择PEI阳离子聚合物转染试剂,适用于悬浮细胞与蛋白表达规模化
  • 原代细胞/干细胞/免疫细胞:选择电穿孔转染,适用于难转染细胞,效率>80%
  • CRISPR基因编辑:选择电穿孔或专用转染试剂递送Cas9-sgRNA RNP,实现高效基因编辑

2026技术趋势

  • 高速qPCR普及:FAST qPCR试剂延伸时间缩短至10秒,全程 <30min,大幅提升通量;cDNA合成+qPCR 1小时内完成
  • 数字PCR(dPCR):绝对定量无需标准曲线,灵敏度达单拷贝水平,适用于稀有突变检测、拷贝数变异分析
  • 一步法RT-qPCR优化:逆转录与qPCR一管完成,减少操作步骤与污染风险,适用于RNA病毒快速检测
  • 无血清转染试剂:新一代脂质体与聚合物转染试剂采用无血清配方,细胞毒性更低,适用于GMP级细胞治疗生产
  • mRNA递送系统:脂质纳米颗粒(LNP)技术成熟,适用于mRNA疫苗、mRNA治疗、CRISPR Cas9 mRNA递送
  • 限制性内切酶工程化改造:通过蛋白质工程降低星号活性、提高热稳定性、扩展识别序列范围
  • 试剂自动化与高通量化:qPCR试剂预分装、自动化液体处理工作站配合,适用于大规模筛查
AciI内切酶-百时美生物

AciI内切酶-百时美生物

产品货号:EG25501VEG25501S产品规格:10rxns同裂酶:BspACI,SsiI识别位点:CCGC5'...C↓CGC...3'3'...GGC↑G...5'
LightNing-快速内切酶-AscI酶

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LightNing®快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LightNing®快速内切酶在通用的CutOne®或CutOne®ColorBuffer中都具有优良的活性,能够在5~15分钟内完成酶切。此外,百时美去磷酸化、连接试剂在CutOne®Buffer中均具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
天根-TIANGEN-2×Taq PCR MasterMix-KT201-02

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TIANGEN-天根-2×TaqPCRMasterMix-KT201-02包含TagDNA聚合酶、dNTPS、MgCI2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2x。快速简便、灵敏度、稳定,可相应减少人为误差。适用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%),有二级结构等的扩增和大规模基因检测。
天根-MD111分子量标准

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天根-MD111-1kb分子量标准;天根-DNALadder1kb-DNA分子量标准等生物试剂供应。由9条线状双链DNA条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。
天根试剂 KT211 2×Taq PCR预混试剂

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天根试剂KT2112×TaqPCR预混试剂为新优化升级的2倍浓度的即用型PCR预混试剂。含有高纯度的TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和优化剂以及稳定剂。具有快速简便、灵敏度-高、特异性-强、稳定性-好等优点,减少人为误差,节约操作时间,降低污染几率。
天根SYBR Green-荧光定量pcr试剂

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荧光定量pcr试剂-天根SYBRGreen产品采用了双组分热启动DNA聚合酶进行PCR扩增,通过检测反应进程中SYBRGreenI的荧光强度,达到检测PCR产物扩增量的目的。
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•可以高效率合成长达13kb的全长第一链cDNA•适宜活性温度为42°C•完全一提供RT反应所需的所有组分
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