LightNing® 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速内切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有优良的活性,能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外,百时美去磷酸化、连接试剂在 CutOne® Buffer 中均具有 100% 活性,支持一管化反应,提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。
CutOne® Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne® Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与 10 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
组分 |
规格 |
LightNing® AscI |
50 μl |
10× CutOne® Buffer |
1 ml |
10× CutOne® Color Buffer |
1 ml |
快速内切酶,可在5~15 min内完成反应
建议反应条件
1× CutOne®缓冲液;
37℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育20 min。
甲基化敏感性
-20℃
常见问题总结:
1.为什么在CutOne® Buffer中加入HSA?
一些酶在反应过程中需要HSA的参与,我们在CutOne® Buffer中添加了HSA,避免反应中额外添加组分,使得酶切反应更加便捷。
2.HSA的添加对于雷霆系列限制性内切酶的功能会产生什么样的影响?
在我们的测试中未曾发现HSA对于雷霆系列限制性内切酶的功能有任何影响。在有些情况下,对于部分的酶切反应有促进作用。
3. 为了保证酶量小于体系的1/10多酶切时往往可加入酶量较少,从而导致酶切不完全,如何解决?
说明书中给出的是最佳反应体系,可以根据具体需求进行适当调整。
酶切不完全的问题可以从这几个方面进行解决:降低底物浓度,提高酶量同时扩大反应体系,或者适当延长反应时间。