细胞培养污染的两种主要形式是化学污染和生物污染。
化学细胞培养污染是指细胞培养物掺入对培养系统产生负面影响的非生命物质。这些物质可能是什么或在哪里可以找到它们?化学污染可能发生在:
1.培养基,用于细胞培养的生长培养基。这是可能发现大多数化学污染物的地方。
2.水:不正确的纯净水,实际上也可能是过度纯净的水。高纯水实际上具有很强的反应性,会导致用于创建和维持细胞培养的设备中浸出有毒化学物质。
3.某些类型的血清,一种富含蛋白质的液体。
4.内毒素,是革兰氏阴性菌的毒素。
5.某些类型的介质暴露在荧光灯下时会产生自由基。
6.重金属。
7.来自塑料储存容器和管道的增塑剂。
8.设备上残留的清洁剂和消毒剂。
另一种主要类型的细胞培养物污染来自生物细胞培养物污染,即通过活生物体掺入细胞培养物,例如:
1.细菌
2.酵母
3.病毒
4..支原体
5.原生动物
6.无脊椎动物
7.来自其他细胞系的交叉污染
这些生物污染物的来源包括从消毒不当的用品和气溶胶等。
如何识别细胞培养污染:
识别细胞污染可以通过多种方法检测生物细胞培养污染。这些方法主要包括:
1.用肉眼目视检查。例如,混浊的薄膜出现可能表明存在细菌污染。
2.显微镜检查(包括电子显微镜、生物显微镜),在显微镜下可以观察到许多不同种类的有害污染物的存在,比如:细菌、病毒和酵母菌。
3.测试 pH 值。例如,酵母的严重污染可能会增加培养物的 pH 值,而细菌污染会降低 pH 值。
4.采用免疫测定法进行测定,例如 ELISA 或酶联免疫吸附测定,其中称为抗体的蛋白质附着在抗原(潜在污染物)上以揭示污染物的存在。
一般情况下,检测化学污染通常比检测生物污染困难得多。通常,它归结为一个清除污染的过程。如果通过上述检测方法排除了生物污染,那么化学污染就有可能发生。
一旦怀疑,化学污染物的鉴定可能需要以逐步的方式进行,其中对每种可能的化学污染物进行处理和测试。例如,可能需要测试水的纯度,或者可能需要建立不同介质、溶液之间的对比实验等等。
总体来说,细胞培养时,细胞培养物面临的污染主要包括化学污染和生物污染两个方面:即化学细胞培养物污染、细胞培养物被重金属、清洁剂、毒素等非生命物质污染和生物细胞培养污染物、活生物体(如细菌、酵母和真菌)等生物物质污染。
排除细胞污染的主要方法有:可以通过显微镜、pH 值测试或 ELISA 等高级测试目视发现生物细胞培养污染物。对于支原体的清除可以使用支原体清除试剂盒。
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