原代细胞是什么?为什么要使用原代细胞?
基于细胞的实验在生命科学、生物医学和药物研究的突破中发挥着关键作用。实验和分析依赖于一个优越的细胞培养系统和细胞类型的仔细选择。直接从组织中分离出来的原代细胞类似于正常的生理机能,并且缺乏与永生化的、基因改变的细胞系相关的修饰。这些被小心地从组织中去除并分离,然后在受控的培养环境中成为一个生长、健康的细胞群。
适当分离的原代细胞应具有低传代和稳定性,具有高活力、转染效率和加倍。分离后,这些细胞可以被膨胀、冷冻、记录和测试。研究人员可以从许多独特的人类和动物细胞类型中进行选择,有不同的大小和包装配置,包括新鲜分离、培养、增殖或低温保存的细胞。冻存管、微孔板、烧瓶或易于使用的总试剂盒提供了进一步的选择。组织和细胞也可以从同一供体中匹配地分离出来。
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原代细胞与细胞系相比有哪些优势?
永生化细胞系在生命科学研究中肯定占有重要的地位。然而,对于特定的应用和研究方案,它们可能与假阳性和假阴性、与培养基的次优配对、误导性的细胞生长以及由于细胞系固有的基因改变而导致的错误数据相关联。与原代细胞相比,永生化细胞系具有重要的表型差异,并可能因修饰和传代而失去生理特性。如果在原代细胞和体内的研究没有得到证实,那么有时只使用永生化细胞系的实验室就会承担风险。
在实验室中分离原代细胞与购买原代细胞
许多人的研究生涯开始于实验室准备细胞,使用各种可用的技术和材料。对于典型的实验室来说,成功地从组织中分离出原代细胞需要大量的时间、金钱、设备、培养器、培养基、试剂、人力资源和培训,即使如此,方案和结果也各不相同,细胞也容易受到污染。此外,大量生产的、一般使用的培养基并没有针对单个原代细胞类型的独特要求进行优化。细胞培养方法可以有很大的不同,这 取决于个人、实验室、材料、试剂、细胞培养塑料,甚至温度、湿度、一年时间和暖通空调系统!这些变量经常导致数据不一致、意外成本、重复和项目延迟。在被污染或自己尝试进行污染失败后,所以研究机构一般会通过通过购买原代细胞来节约成本。细胞系的制造是精心隔离、质量控制、测试、合格、严格特征化的细胞和培养基来实现的
。另一方面,非标准方法会对表型不一致、污染、生长不良、重复、无效结果和错误数据造成风险,所有这些都会带有大量的人员成本。不适当的技术和未优化的培养基也会导致细胞死亡和分离物中不需要的细胞类型。
原代细胞优化培养的提示
尽管原代细胞有许多优势,但除非是出所周知的挑剔,否则是培养的挑战。可用的资源概述了使用初级单元格实现最佳结果的步骤。在使用细胞之前,实验室工作人员应该审查商业产品提供的细胞特定说明。应注意确保选择相应的、优化的、细胞特异性的生长培养基、试剂和培养条件,这有助于保持较佳的细胞健康、行为和性能。细胞培养瓶和培养板必须适用于原代细胞培养、表面处理,在某些情况下还可以涂有促进细胞电镀和粘附的生物分子。
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