可穿透性细胞培养小室选型与品牌

来源：共培养小室滤膜规格时间：2025-10-27

可穿透性细胞培养小室作为模拟体内细胞间动态交流的核心工具，凭借其底部多孔滤膜的 “物理分隔 - 分子穿透” 特性，成为肿瘤微环境研究、干细胞旁分泌调控、免疫细胞杀伤效应验证等领域的必备设备。

一、两类特定实验操作流程

（一）Caco-2细胞药物转运实验（模拟肠道吸收）

Caco-2细胞是肠道上皮细胞模型，需用Transwell小室构建单层屏障，检测药物从“肠道腔侧” （上室）到“血液侧”（下室）的渗透率，核心是保证细胞单层完整性。

步骤	操作细节	关键注意事项
1. 小室准备	选择0.4μm孔径PC膜Transwell小室（6 孔板），用无血清DMEM浸泡膜30分钟。	膜需完全浸润，避免残留气泡影响细胞贴壁。
2. 细胞铺板	Caco-2细胞（对数期）用含10%胎牛血清的DMEM重悬，上室接种1×10⁵ cells/孔。	铺板后轻轻摇晃培养板，确保细胞均匀分布在膜上。
3. 单层培养	37℃、5%CO₂培养21天，每2 天更换上、下室培养基（下室培养基量是上室的2倍）。	培养第14天起，每天用电阻仪测TEER值（>500 Ω·cm² 表示单层完整，可开始实验）。
4. 药物加样	弃去旧培养基，上室加含药物的无血清DMEM（如10μM药物），下室加等量无血清 DMEM 。	药物需用培养基充分溶解，避免沉淀。
5. 取样检测	分别在0.5、1、2、 4小时取上、下室样品，用HPLC或LC-MS测药物浓度，计算渗透率（ Papp值）。	取样后需补加等量新鲜培养基，维持体系体积稳定。

（二）干细胞与内皮细胞共培养实验（模拟血管生成）

常用Millicell®小室构建“干细胞-内皮细胞 ”互作模型，分间接共培养（仅分子交换）和直接共培养（细胞可接触），适配不同研究目的。

步骤	间接共培养（0.4μm孔径膜）	直接共培养（3.0μm孔径膜）
1. 小室选择	Millicell®悬挂式小室，0.4μm PET膜（阻止细胞穿过，仅允许因子交换）。	Millicell®站立式小室，3.0μm PC膜（允许细胞突起接触）。
2. 细胞接种	上室接种干细胞（如间充质干细胞，5×10³ cells/cm²），下室接种内皮细胞（如HUVEC，1×10⁴ cells/cm² ）。	上室接种内皮细胞，下室接种干细胞，共用“干细胞培养基:内皮细胞培养基 =1:1” 的混合培养基。
3. 共培养维护	每3天更换下室培养基（上室培养基量仅覆盖膜表面，避免淹没细胞）。	每天观察细胞形态，共培养7天（内皮细胞会形成管腔样结构）。
4. 结果检测	收集下室培养基，用ELISA测血管生成因子（如VEGF）浓度；或免疫荧光染干细胞标志物（如CD90 ）。	用荧光染料（如Dil-Ac-LDL）染内皮细胞，显微镜下计数管腔数量和长度。

二、细胞共培养小室的核心参数对比

市场上以Corning（Transwell）、NEST（国产高性价比）、 Millipore（Millicell®原厂）为主，三者在膜材质、适配场景、价格上差异较大，可按需选择。