骨骼肌是一种横纹肌，通常是通过肌腱固定到骨骼上，其伸缩可以带动骨骼的移动，促进机体运动。
肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维，每一肌原纤维都有相间排列的粗肌丝及细肌丝。肌纤维收缩并不是肌纤维中肌丝本身的缩短或卷曲，而是细肌丝在粗肌丝之间滑行的结果，肌丝滑行使肌节长度缩短，肌原纤维缩短表现为肌纤维收缩。
一、实验前准备
实验开始前，将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿，15ml 离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台，以紫外线照射 30min。
按照含 0.2%的 XI 胶原酶、0.2%的中性蛋白酶、0.1%的胶原酶进行配制消化液，用0.22微米的 PES 微孔滤膜进行过滤除菌，置于 50 毫升离心管中，可直接用于组织消化。瓶口消毒后室温待用。
取出无菌培养皿，分别作好标记，吸取适量 PBS 置于相应标记的培养皿中。
无菌条件下，准备好各种大小的眼科剪刀、止血钳、眼科镊子和手术刀。将断颈处死后浸泡于体积分数为 75%乙醇的SD 大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。
二、骨骼肌提取
眼科剪刀剪开大鼠后肢皮肤，暴露腿部肌肉，用手术刀小心割取后肢大腿肌肉，同样方法分离另一后肢大腿肌肉。小心剪取表面无附着膜和脂肪组织的肌肉，置于装有 PBS 的无菌培养皿中。
吸取适量消化液于相应标记的培养皿中。
将剪取的骨骼肌在无菌 PBS 浸泡清洗，去除脂肪组织后放置于含消化液的培养皿中，采用眼科剪刀剪碎骨骼肌组织，成 1 平方毫米不规则碎片。
轻轻摇匀，室温静置消化 30 分钟
收集组织悬液于 50 毫升离心管中，用消化液反复冲洗培养皿，直至将全部组织块收集到离心管内。
轻轻吹打混匀组织块悬浮液.
配平离心：使用低速离心机每分钟 1000 转，室温离心十分钟。
三、骨骼肌悬液制备及培养
离心后小心去除上清，不要吸到底部的组织块沉淀，用含 20%胎牛血清的 DMEM 培养基重悬，轻轻吹打混匀，制成悬液。
均匀转移至六孔板中，轻轻摇匀，标记时间后放于 37 ℃、体积分数为 5%的CO2 饱和湿度培养箱中培养。
本次实验采用差速贴壁法去除成纤维细胞,37 ℃培养 1 小时 后，吸取上清液置于另一孔中继续培养。
每隔一小时转移一次，转移 3-4 次。4 天后换液, 以后每天换液 1 次，直到增殖达到融合。
四、细胞观察及鉴定
差速培养后，细胞 24 小时后开始贴壁,96 小时后完全贴壁，倒置显微镜下每天观察细胞生长及形态特征，传代培养纯化至 P3 代用于后续试验。
采用 HE 染色和a-actin 染色进行骨骼肌细胞鉴定。
结果表明：本实验所用的消化液以及差速贴壁法可分离培养出纯度高、活力旺盛的骨骼肌细胞。
五、注意事项
1、消化液的制备及消化时间
合适的消化液以及消化时间的把握, 是实验取材的关键：
合适的消化液利于骨骼肌细胞从基膜中释放出来。
酶作用时间不足则获得细胞较少,作用时间过长则可致细胞受损、生长状态不佳。
2、肌肉组织要尽可能剔除表面的膜和脂肪组织：
肌肉组织表明的膜和脂肪组织去除利于后续细胞的纯化，减少传代次数，获得纯度高的骨骼肌细胞。
3、纤维细胞的去除 :
本实验采用差速贴壁法去除成纤维细胞,37 ℃培养 1 小时后移至另一孔进行培养。
转移两次，有效去除骨骼肌细胞中的成纤维细胞。
更多实验室仪器，细胞培养耗材，生物试剂请进入苏州阿尔法生物进行了解。
苏州阿尔法生物实验器材有限公司自2008年成立，扎根苏州生物医药产业园，专注为各类科研机构，制药企业提供实验室仪器、科研试剂、实验耗材全品类一站式供应解决方案，覆盖分子生物学、细胞培养、微生物检测、药物研发、临床体外诊断、理化分析六大主流实验场景，一站式配齐实验室全部所需物资。
公司持有梅特勒托利多、海尔生物、朗基、知楚、天能、恒尔、天根生化、耐思等国内外一线仪器试剂品牌正规授权，全线产品具备完整质检报告、注册资质，满足高校实验室、药企研发部、第三方检测机构、医院检验科CNAS、GMP合规使用要求。
仪器品类涵盖PCR仪、超净工作台、摇床、低温冰箱、细胞培养箱、电泳仪，凝胶成像仪、离心机、移液器、分光光度计等全套实验室设备；试剂包含细胞培养基、胎牛血清、生化试剂盒、标准品、缓冲液；耗材覆盖离心管、培养皿、枪头、过滤膜、冻存管等一次性塑料制品，上万种常备库存。
苏州自有大型恒温仓储中心，绝大多数仪器耗材现货当日出库，江浙沪地区快速配送。配备专业实验技术顾问，可根据不同实验场景提供精准产品选型搭配，同时提供仪器安装调试、故障检修、耗材批量定制、小样申领配套服务，不用客户分开对接多家供应商，采购流程高效省心。
高校课题组、生物医药企业、检测实验室批量采购、仪器耗材配套询价，均可拨打全国服务热线0512-62956104，或者18934597460 /18020269905欢迎前往苏州工业园区星湖街218号生物纳米园A5楼301室实地看样洽谈。
