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常见问答
利用生物反应器进行Mdck细胞的微载体培养方法
来源: 苏州阿尔法生物 时间:2021-09-03

MDCK细胞在基因制药行业通过生物反应器规模化微载体培养后作为流感疫苗和禽流感疫苗中的接种细胞大量使用。

目前禽流感疫苗的生产工艺主要有三个:即使用鸡胚直接病毒增殖工艺、转瓶培养传代细胞增殖病毒工艺和生物反应器微载体培养工艺。

采用生物反应器微载体培养工艺的优势在于可以进行规模化培养,有利于提升细胞密度和病毒滴度,可以有效实现批次间的品质差异,

具有较好的稳定性和安全性,降低生产成本及材料消耗。 

Mdck细胞的生物反应器微载体培养工艺


微载体培养

MDCK细胞微载体培养工艺的主要步骤:

1) 处理微载体: 在进行细胞微载体时,对于GF系列微载体需要用纯化水浸泡3-24H后再用PBS缓冲液清洗。而Cytodex系列微载体则可以直接用pH=7. 4的PBS缓冲液浸泡清洗,高压灭菌,冷却静置,再加入细胞培养液即可;

2) 种子细胞的培养:MDCK细胞解冻复苏后在细胞培养瓶中进行贴壁培养,当生长密度达到90%时,就可以进入转瓶培养阶段。

3)  细胞培养瓶扩培:消化后的细胞继续加入培养基稀释至相应倍数,接入细胞培养瓶进行种子细胞扩培。当生长致密度达90%以上时,消化细胞按照1:10的比例接入生物反应器中进行培养。

4)  微载体接种培养:在生物反应器内植入微载体,微载体密度为 2-25g/L,每个载体上的细胞数大概为5-50个左右。 

5) 病毒接种: 当生物反应器内的MDCK细胞在微载体表面的致密度达90%以上时,停止搅拌后按照要求浓度接入病毒,并进行补液操作;

6) 产物收获: 病毒介入后10-12小时后,需要每小时取样观察CPE变化。当感染率大85%左右时可进行病毒收获阶段

  注意:在用摇床进行转瓶培养时,转速大概为2-15rpm/min ;不宜过高。细胞培养的适宜生长温度为37°C。

            在病毒接入生物反应器后,注意搅拌器适宜转速为:25rpm,适宜培养温度为33°C左右,ρΗ维持在7· 5即可,溶氧率为50%。  

细胞培养

生产投入成本预估

采用生物反应器微载体成本根据微载体的不同,投入成本也会有所差异,采用Cytodex系列微载体按每1000L病毒收获液估算投入成本大概为31,0000元左右;采用GF系列微载体进行生产,按每1000L病毒收获液投入成本估算值为16,0000元左右;

生物反应器主要用于MDCK细胞、CHO细胞 、HEK293细胞培养,悬浮细胞培养、贴壁细胞培养、微载体培养、微生物培养。我们 还可以 可根据客户要求的尺寸进行生物反应器的定制化操作, 实现了厂商直供,一罐多用,满足不同的用户需求。苏州阿尔法生物还同时提供免费的安装服务、免费技术支持、免费操作指导等服务。如需了解更多,请 0512-62956104   18934597460 进行询问。