天根 动物组织总RNA提取试剂盒 DP431

RNAprep pure Tissue Kit 采用离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从动物组织中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。30-40 分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度高，没有蛋白质和其他杂质污染。

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天根 动物组织总RNA提取试剂盒 DP431产品特点：

针对动物组织配置，操作更简单、流程更优化。

配有DNaseⅠ，可有效去除DNA 污染。

RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求很高的下游实验。

操作安全可靠，无需氯化铯梯度离心，无需氯化锂或乙醇沉淀。

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下游应用：

RT-PCR

Northern blot、Dot blot

Real-time RT-PCR

芯片分析

polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆

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样本保存推荐使用RNAstore 样本保存液(DP408)进行组织样本的保存。

预防RNase污染，应注意以下几方面

1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3. RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

4. 玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

5. 配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。）使用前注意事项1. 操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RL中加入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。

6. 配好的RL 4℃可放置一个月，裂解液RL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。2. 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

7. 以下操作如非指明，均在室温下进行。DNase I储存液的配制将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。

8. 注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。

RNA纯度及浓度检测

完整性： RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲 液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看 到非常明显的rRNA条带。28S rRNA的量约为18S rRNA的两倍，说明RNA的完整性较好。

纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读 数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志. OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值 影响。同一个RNA样品，假定在10 mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之 间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。

浓度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-Free ddH2O稀释n 倍，用RNase-Free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的 计算： 终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40

实验例

组织取样量展示

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