基因敲除细胞株-MHCC97H KO-hKLF4

细胞名称：基因敲除细胞株- MHCC97H KO-hKLF4

细胞简称：MHCC97H KO-hKLF4

产品货号：CGKO-M2125

修饰基因：hKLF4

修饰类型：敲除

转导方法：质粒电转

抗性基因：Puro

克隆类型：纯合子

细胞鉴定：PCR，测序

种属来源：人

组织来源：肝

疾病特征： 高转移潜能肝癌细胞

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：48-72 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

参考文献：

1. Dang H., Steinway S.N., Ding W., Rountree C.B.

Induction of tumor initiation is dependent on CD44s in c-Met(+) hepatocellular carcinoma.

BMC Cancer 15:161-161(2015)

2. Tian M.-M., Cheng H., Wang Z.-Q., Su N., Liu Z.-X., Sun C.-Q., Zhen B., Hong X.-C., Xue Y., Xu P.

Phosphoproteomic analysis of the highly-metastatic hepatocellular carcinoma cell line, MHCC97-H.

Int. J. Mol. Sci. 16:4209-4225(2015)

3. Wang K., Lim H.Y., Shi S., Lee J., Deng S., Xie T., Zhu Z., Wang Y., Pocalyko D., Yang W.J., Rejto P.A., Mao M., Park C.-K., Xu J.

Genomic landscape of copy number aberrations enables the identification of oncogenic drivers in hepatocellular carcinoma.

Hepatology 58:706-717(2013)

4. Li Y., Tian B., Yang J., Zhao L., Wu X., Ye S.-L., Liu Y.-K., Tang Z.-Y.

Stepwise metastatic human hepatocellular carcinoma cell model system with multiple metastatic potentials established through consecutive in vivo selection and studies on metastatic characteristics.

J. Cancer Res. Clin. Oncol. 130:460-468(2004)

5. Ding S.-J., Li Y., Shao X.-X., Zhou H., Zeng R., Tang Z.-Y., Xia Q.-C.

Proteome analysis of hepatocellular carcinoma cell strains, MHCC97-H and MHCC97-L, with different metastasis potentials.

Proteomics 4:982-994(2004)

|   细胞接收后处理方法

1.运输方式：冻存管（默认发送方式）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。

④ 将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

⑤ 将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。

⑥ 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑧ 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。

2.运输方式：培养瓶（贴壁细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。

③ 小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。

④ 镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。

3.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。

③ 将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。

④ 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。

⑤ 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。

4.运输方式：血清管

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。

③ 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

④ 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。

⑤ 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。

⑥ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑦ 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑧ 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。

5.运输方式：“细胞胶囊”技术
①  “细胞胶囊”包括细胞管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

②  收到“细胞胶囊”后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

③ 用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。 

④ 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。

⑤ 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。

⑥ 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。

⑧ 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。