h460细胞株

细胞名称：人大细胞肺癌细胞（STR鉴定正确）

细胞别称：NCI-H460细胞；NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT-460; NCI-460

细胞简称：h460细胞株

产品货号：TCH-C286

种属来源：人

组织来源：肺

特征：肺癌

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：RPMI-1640 ＋10% FBS＋1% P/S

h460细胞株培养基货号：TCH-G286

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：24-48 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO 2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

  NCI-H460细胞是从一位大细胞肺癌者的胸水中建立的。h460细胞株表达的p53 mRNA易于检测，其水平与正常肺细胞相当，未表现出NCI-H460细胞DNA总体结构异常。NCI-H460细胞角蛋白和波形蛋白纤维染色阳性；神经丝三联体蛋白阴性。

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细胞培养操作说明

细胞的复苏：

 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁；

 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的15ml 离心管中，1000rpm离心 5min；

 3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 

传代： 

（1）贴壁细胞：

 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；

（2）悬浮细胞: 待细胞达到 1x10^6/ml 左右可按照以下方法换液培养或传代。

方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。

方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。冻存： 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 3. 加入适量的无血清细胞冻存液于离心管中，调整细胞浓度至 1~5×10 6 cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液；

4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中；

5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮气相中存储。可以使用一步法冻存液。