标签：摇瓶 缓冲液 微生物 种子制备

摇瓶种子即接种在摇瓶内用于摇瓶发酵试验或发酵罐生产的微生物菌种。用于接种传代第一代的种子称为“母瓶”，用于接种传代第二代的种子就叫做“子瓶”。 “母瓶”和“子瓶”均可应用在微生物发酵罐进行规模扩培传代培养。

一、培养基制备
在摇瓶中进行种子制备的主要目标是培养强生长活性的营养菌体，所以在配制培养基阶段必须以满足菌体生长要求为目的。比如在培养基中添加足量的营养物质，包括碳、氮源、缓冲液、无机盐和生长因子等物质。在培养基中添加缓冲液的主要作用是调节培养基中的PH值，是培养基的PH环境长期处于稳定状态。常用的PH调节剂主要有磷酸盐缓冲液、PBS缓冲液等。培养基分装完成，封口后需要置于高压灭菌锅中进行高压灭菌。 灭菌完成后缓慢降压，防止因气压骤降造成培养基冲击瓶塞。

二、种子接种

在进行摇瓶种子接种时，普遍采用的是斜面法或米孢子粒计数接入的方式。 如果采用米孢子粒计数接入接种法进行接种的缺陷在于，接种量的一致性很难掌握，这样容易导致摇瓶种子的质量稳定性差。因此，对于接种量较为敏感的菌种，一般会采用悬液接种法进行接种。悬液接种法是用蒸馏水将细胞或微生物孢子洗脱成为混合液，然后按固定体积数量接种在摇瓶种子培养基中的一种接种方法。悬液接种法增加了接种数量的均一、稳定性。 

三、振荡培养 

 摇瓶种子采用的振荡培养摇床主要有旋转式振荡和往复式振荡两种。正常情况下生产抗生素类的企业使用较多的是旋转式振荡摇床。旋转式振荡摇床由于在主轴和从动轴间会有25mm-50mm左右的偏心距产生，所以在振荡作用时更有利于气体交换。部分特殊的微生物也会使用振荡培养箱进行培养。 

四、收获保存 

摇瓶种子在培养完成后尽量立即使用。如果临时用不到的可放在4℃冰箱中保存，但是保存期以不超过3天为宜。为避免影响生产质量，这类冷藏处理的种子多数用于摇瓶发酵试验或小型发酵罐实验，一般不直接做生产用种子。

五、影响摇瓶种子的质量

影响微生物摇瓶种子质量的因素主要有：菌体浓度、培养基成分、接种密度、设备转速等。 

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