细胞生物学研究、创新药开发等领域经常会进行细胞体外培养,但是很多实验员不知道该怎么选购细胞、细胞培养基、细胞培养试剂,本节小编带你初步了解一下细胞系的选择技巧、购买细胞培养基应考虑的因素。
一、细胞培养的环境条件
细胞的体外培养需要为细胞创造良好的细胞的存活和增殖环境,这样的环境条件包括培养温度、湿度和 CO 2水平、营养成分、酸碱度、渗透压等。
下表为大多数哺乳动物细胞的细胞培养的适宜条件。
酸碱度 7.0–7.4
渗透压 280–320 mmol/千克
二氧化碳_ 5–10%
温度 35–37°C
二、细胞系购买时应考虑的因素
细胞系购买可以从相对完善的细胞库或细胞供应处进行购买。苏州阿尔法生物提供的常用细胞库里的细胞株适用于基因编辑、新药开发等领域。 细胞系的选择需要考虑到细胞系的功能特点、生长速率、铺板效率、生长条件和生长特征、克隆效率、培养方式等因素,如果您想高产量表达重组蛋白,您可以选择可以悬浮生长的快速生长细胞系。
不同的细胞系其生长特点以及功能是不一样的,比如:CHO细胞,HEK细胞,VRO细胞为哺乳动物细胞多用于抗体开发、肿瘤研究、功能蛋白新药开发等领域;成纤细胞由于细胞形态扁平、规则故多使用贴壁培养的方式进行培养,规模化扩培可使用贴壁生物反应器进行培养。
三、细胞培养基购买应考虑的因素
培养的细胞一般需要使用细胞培养基。配制细胞培养基时需要考虑四种关键成分,即:基础培养基、谷氨酰胺、血清和抗生素。
1. 基础培养基 基础培养基是营养物质与盐的混合物。常见的培养基有MEM、DMEM 和 RPMI培养基、F12培养基等。多数使用液体培养基。
2.谷氨酰胺 谷氨酰胺是细胞生长所必需的必需氨基酸。可以购买含有谷氨酰胺、不含谷氨酰胺或含有稳定的二肽谷氨酰胺替代品的基础培养基。重要的是要确保您的培养物在正常生长条件下含有谷氨酰胺。
3.动物血清 细胞通常在补充有动物血清的基础培养基中生长。这被称为“完整”介质。血清为细胞提供所需的生长因子和营养素。胎牛(胎牛)血清是常用的。血清目前主要有澳洲胎牛血清、美洲胎牛血清和国产胎牛血清等。在大多数情况下,选择完全培养基已添加血清无需单独购买。
4.抗生素 细胞培养基通常补充有青霉素和链霉素的抗生素组合,作为防止细菌生长的措施。使用无菌技术,可以在不使用抗生素的情况下培养健康的细胞培养物。
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