细胞划痕实验是指将细胞培养在培养皿或平板上，待细胞融合后用枪头或其他硬物在中 央区域画一条线，这条线内的细胞被机械力去除掉了，然后将细胞继续培养，观察细胞向无 细胞的划痕区域迁移的情况，来判断细胞的迁移能力。其意义在于：价格低廉，操作简单， 还有很重要的一点在于细胞外围环境简单、单纯，容易控制，是肿瘤细胞基本的研究方法。

一、实验前准备

实验开始前，将离心管、吸管筒、移液枪、枪头，直尺等放入无菌超净工作台，以紫外 线照射 30min。然后，采用通风机通风 3min。 取出无菌 6 孔板，用黑色记号笔在 6 孔板底部，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔 0.5~1cm 一道，横穿过孔，每孔至少穿过 3 条线。每条黑线的上下缘与划痕交叉点作为观察 点，这样一方面便于观察另一方面可以一次取多个观察点，最终可以获得多个数据。 画好横线后，在板上分别做好标记。 取下试剂瓶和离心管上的封口膜，且将每个试剂瓶和离心管拧松，方便后续试验的操作。

二、细胞准备

取出处于对数生长期的健康细胞，吸掉原来的培养液，用无菌 PBS 清洗细胞。加入 1ml 胰酶消化液消化细胞，显微镜下观察所有细胞完全皱缩变圆后加入完全培养基终止消化。收 集细胞悬液于 15ml 离心管中，800rpm/min 室温离心 5min。用罗氏 CASY 快速细胞计数及 活率分析仪进行细胞计数，弃去上清，加入培养基重悬细胞。，以每孔 1~4×105 细胞的密度 接种到 6 孔培养板上，在含 10%胎牛血清的 DMEM 培养基中培养一天。具体数量因细胞种 类不同而不同，掌握为过夜能铺满。

三、直线划痕

取出铺满六孔板的细胞，用 200ul 枪头垂直于细胞表面，由孔一端划向另一端。尽量垂 直于背面的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。此时可在培养皿的表面清晰看到细胞表面呈 #字形划痕。

四、PBS 清洗细胞及培养

吸掉旧培养基，用无菌 PBS 洗细胞表面 3 次，去除划下的细胞，加入含有 1%胎牛血清 的培养基为阴性对照，及含有相应浓度药物的 1%胎牛血清培养基为药物刺激组；每组 2 个 复孔。 轻轻摇动六孔板，使药物与细胞培养液充分混合，放入 37 度，5%C02 培养箱中培养。

五、结果观察

分别取划痕 0 小时、24hr、48hr 后观察不同处理组的痕道宽度。 结果可见：细胞划痕后 48h 观察到对照组细胞划痕宽度恢复约 90％，而药物抑制组恢 复约 60％。 表明加入药物后，由于药物的作用，使细胞迁移受到抑制，而未加入药物的细胞保持原 有的迁移能力，在 48h 后通过迁移将划痕掩盖。

六、注意事项

1、细胞密度 注意细胞生长状况，选择适当的细胞接种密度，对不同的细胞要观察其贴壁率等，保证 培养终止时密度适当。

2、冲洗细胞缓慢轻柔 在用 PBS 缓冲液冲洗时，注意贴壁缓慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照 结果。

3、低浓度或无血清培养 划痕 PBS 冲洗后应该加入无血清培养基或者低浓度血清培养基，以排除细胞本身增殖 对实验的影响。

苏州阿尔法生物实验器材有限公司十三年来专注于生物实验室仪器设备B2B专业供应，主要产品包括生物反应器、发酵罐、细胞生物反应器、微生物发酵罐、摇床等细胞培养及制药相关实验室仪器。同时提供细胞培养瓶、滚瓶、培养板、移液器吸头、离心管、PCR管等实验室耗材。更多FDA 相关问题0512-62956104或 18934597460咨询。