本操作标准说明书旨在提供详细指导,使用天根基因组提取试剂盒从血液样本中提取血液基因组DNA 的详细步骤。
一、实验试剂及实验耗材的准备:
- 天根基因组提取试剂盒
- 血液样本
- 离心管
- 移液管和吸头
- 微离心机
- 振荡器
- 乙醇
- RNase A
- 蒸馏水
二、实验步骤
1.样本准备
- 使用EDTA管收集血液样本并标记。
- 轻轻颠倒管子数次,确保充分混合。
2.溶解红细胞
- 向2ml离心管中加入200μl血液裂解缓冲液。
- 将20μl血液样本转移到离心管中。
- 加入20μl蛋白酶K,轻轻颠倒均匀。
- 在56°C孵育混合物10分钟,使红细胞溶解。
3.DNA结合
- 向混合物中加入200μl结合缓冲液并充分混合。
- 以12,000 rpm离心管,离心1分钟。不打扰沉淀物的同时废弃上清液。
4.DNA洗涤
- 向离心管中加入500μl洗涤缓冲液I,使用高速离心机以12,000 rpm离心1分钟,废弃上清液。
- 重复使用洗涤缓冲液II进行洗涤步骤,使用高速离心机以12,000 rpm离心2分钟,废弃上清液。
- 再次用使用离心机以12,000 rpm离心3分钟以去除剩余的乙醇。
5.DNA洗脱
- 向沉淀物中加入50-100μl洗脱缓冲液。
- 在室温下孵育离心管5分钟以洗脱DNA。
- 以12,000 rpm离心2分钟,收集洗脱的DNA溶液。
6.定量和储存
- 使用分光光度计或适当的DNA定量方法测量DNA的浓度和纯度。
- 将提取的DNA储存于-20°C低温冰箱中,供以后使用。
三.天根基因组提取试剂盒 使用注意事项
- 在整个操作过程中,佩戴适当的个人防护设备,如手套和实验服。
- 遵循良好的实验室实践,保持清洁的工作环境。
- 按照天根基因组提取试剂盒的使用说明书进行操作。
四、故障排除
- 如有任何困难或意外结果,请参考天根基因组提取试剂盒手册的故障排除部分或咨询技术支持。
提示:本操作标准说明书为使用天根基因组提取试剂盒从血液中提取基因组DNA提供了一般指南。用户应遵循试剂盒手册的说明,并根据具体需求和样本类型的变化自定义协议。
本操作标准旨在确保使用天根基因组提取试剂盒进行高质量的DNA提取,并标准化过程以获得一致可靠的结果。
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