使用流式细胞仪进行细胞分析的流式细胞术广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达、鉴定并确定异质细胞群中的不同细胞类型、评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和容积。

   主要用于测定荧光标记的抗体检测蛋白产生的荧光强度，或结合了特定细胞分子的配体，如碘化丙啶与 DNA 的结合。

其染色过程包括从细胞培养物或组织样品制备单细胞悬液。然后将获得的细胞培养在包含未标记或荧光标记抗体的试管或多孔板中，再用流式细胞仪分析。

流式细胞仪主要有两型：

小型机和综合型。除具备检测分析功能外，还具有细胞分选功能，多用于科学研究。

流式细胞仪主要技术指标：

1.流式细胞仪的分析速度：

一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞；

2.式细胞仪的荧光检测灵敏度：

一般能测出单个细胞上<600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分；

3.前向角散射（FSC）光检测灵敏度：

前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能够测量到0.2μm ～0.5μm；

4.流式细胞仪的分辨率：

通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%，这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的；

5.流式细胞仪的分选速度：

一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99% 以上；

细胞内染色：

用于流式细胞术的细胞内抗原染色方案取决于可让抗体接近内部细胞蛋白的固定和透化方法。无论何种情况，成功的染色都离不开通过抗体滴定进行的实验条件优化、使用适合的对照正确设置流式细胞仪以及优化的固定和透化步骤。

分泌蛋白的检测：

分泌蛋白的检测十分困难，因为蛋白会在检测前从细胞中释放出来且可能快速降解。高尔基体阻断剂（如布雷非德菌素A）可用于抑制表达蛋白的分泌，使其仍保留在高尔基体中。然后再用细胞内染色法检测靶标蛋白。

荧光染料偶联剂的选择

给定的抗体能否从阴性信号中分辨阳性信号取决于所用的荧光染料偶联剂。

   各荧光染料的相对强度一般指导原则是，从亮到暗依次为：PE、PE-Cy 7、PE-Cy5 、APC、APC-Cy7、Alexa Fluor 647®、 Alexa Fluor 700®、FITC、Pacific Blue 和 Alexa Fluor 488®。这是一般排序，个别抗体的相对强度可能有所差异。

    高度表达的抗原通常可被检测且与阴性对照区分开来，无论使用何种荧光染料。表达较少的抗原需要较亮的 PE 或 APC 偶联剂提供的高信号背景比，以将阳性细胞完全从未染色的细胞中区分开来。

在流式细胞仪中，Cv值（即变异系数）的高低反映了实验数据的离散程度。通常情况下，较低的Cv值表示实验结果的可靠性更高。

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