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SH-SY5Y细胞转染优化方法和实验步骤详解
来源: SH-SY5Y细胞培养 时间:2023-09-05

SH-SY5Y细胞是神经母细胞瘤细胞系中常用的模型系统,广泛用于神经生物学和神经药理学研究。转染SH-SY5Y 细胞是一项重要的实验技术,在基因功能研究、蛋白表达和定量分析等方面扮演着关键角色。然而,由于SH-SY5Y细胞的特殊性质,使用传统转染方法可能会遇到一些困难。因此,本文将介绍一种优化的SH-SY5Y 细胞转染方法,并详细描述每个步骤。

材料与试剂:

- SH-SY5Y细胞系:可从Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或其他来源获得。

- 细胞培养基:Dulbecco's Modified Eagle MediumDMEM/F12混合培养基。

- 热稳定型胰酶:用于细胞的传代与分离。

- 转染试剂:例如,聚乙烯亚胺(PEI)、脂质体等。

- 目标基因的质粒DNAsiRNA:用于转染和表达。

- Opti-MEM:用于稀释转染试剂和质粒。

SH-SY5Y细胞

优化方法:

一、准备SH-SY5Y细胞

1. 获得SH-SY5Y细胞系并进行培养。

2. T25细胞培养瓶中分别加入10 ml完整的DMEM/F12培养基及10%胎牛血清(FBS)。

3. SH-SY5Y细胞从细胞冻存管中复苏,并将细胞传递至培养瓶中。

4. 37℃、5% CO2的培养箱中培养细胞,直至细胞达到80-90%的密度。

二、转染前的预处理

1. 转染前用DMEM/F12培养基含10% FBSSH-SY5Y细胞进行预处理。

2. 将细胞培养至80-90%的密度。

3. 1X PBS洗涤细胞2次,去除细胞内的残留培养基。

三、转染操作

1. 根据转染试剂的使用说明,将转染试剂稀释至合适的浓度,如使用PEI转染,可在Opti-MEM中稀释PEI至最终浓度。

2. 在另一个离心管中将质粒DNAsiRNA按照使用的量稀释至合适体积,并在Opti-MEM中混合均匀。

四、转染操作步骤

1. 向细胞中加入预先稀释好的转染试剂,注意不要形成气泡并避免细胞过度干扰。

2. 轻轻震荡培养瓶,使转染试剂均匀分布。

3. 将稀释好的质粒DNAsiRNA加入到培养基中,与转染试剂充分混合,避免形成沉淀。

4. 震荡培养瓶并置于37℃的培养箱中进行培养。

5. 根据研究需求,在48-72小时后进行下一步实验(如蛋白表达、基因敲除等)。

本文详细介绍了一种优化的SH-SY5Y细胞转染方法。通过合适的细胞预处理步骤,并使用适当的转染试剂和质粒DNA/siRNA浓度,可以实现高效且可重复的SH-SY5Y细胞转染。值得指出的是,转染条件可能因具体实验目的而略有不同,因此每位研究者都应根据实验需求进行适当的优化。这种优化后的转染方法将有助于更好地理解SH-SY5Y细胞中的基因功能并推动神经科学研究的发展。

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