免疫测定 (IA) 是极其重要的生物分析方法，免疫测定的原理及免疫测定方法用于量化溶液中从小分子到大分子的分析物（血清、毒素、激素等），使用抗体或抗原作为生物识别剂。通常应用于广泛的科学学科，包括生物制药分析、临床诊断、环境监测和食品检测。

酶联免疫吸附试验

1917 年，奥地利生物学家卡尔·兰德施泰纳 (Karl Landsteiner) 开发了分析具有抗原特性的小分子的方法。他的方法成为发展免疫分析的框架。从 1995 年到 2017 年，科学家们开发了广泛的免疫测定法，可以对生物样品进行定性和定量检测。

IA在临床决策中起着至关重要的作用，因此对于医疗保健环境来说是必不可少的。大多数免疫测定方法基于放射免疫测定（RIA）和酶免疫测定（EIA）。一种常见的 EIA 类型是酶联免疫吸附测定 (ELISA)，它有许多应用。ELISA 和 RIA 试剂盒均可在市场上买到，用于检测各种分析物。这些测定法具有极高的特异性和敏感性，因此可作为大量分析物（抗原）的金标准。免疫测定的主要优点包括价格低廉、检测低水平分子的能力、准确性和广泛的适用性。  

免疫测定原理

为应对细菌和病毒等外来物质或抗原，所有动物和人类都会通过免疫系统产生抗体。抗体是 Y 形抗原特异性蛋白质，可在特定位点与抗原结合。如上所述，免疫测定基于抗体-抗原结合关系来检测溶液中的特定分子。       

科学研究中使用的不同类型的来进行免疫测定。

当前的免疫测定方法主要有以下几种：

1.放射免疫分析 (RIA)

放射免疫测定法使用抗体来量化生物样品中存在的抗原量。这种检测非常灵敏和特异，因此它可以检测到样品中低至几个象形图的抗原。RIA 的基本原则是竞争性约束。在该方法中，目标抗原使用放射性同位素标记并与其特异性抗体结合。

放射性抗原与非放射性抗原（来自血清样品）竞争固定数量的受体结合位点或抗体。抗体的竞争导致一定数量的标记抗原的释放，因此它与标记抗原与未标记抗原的比例成正比。

在增加未标记抗原的浓度时，它们取代结合的标记抗原。随后，将结合的抗原与未结合的抗原分离，并测量残留在上清液中的游离抗原的放射性。RIA 方法的主要优点是以极高的精度和灵敏度测量分析物。

2.酶免疫分析 (EIA)

尽管酶免疫分析 (EIA) 的主要原理与 RIA 相似，但它使用酶作为标记，而不是放射性同位素。在该测定中，酶分子通过合适的反应偶联到免疫分析试剂中，随后进行正常的免疫测定程序。

结合和游离部分分离后，通过添加底物测定酶活性。由于酶促反应，形成有色产物，使用分光光度计对其进行测量。测量的信号或产品颜色的强度类似于分析物的浓度。

3.荧光免疫分析 (FIA)

荧光免疫分析也与RIA的工作原理类似，只是标记的是荧光团而不是放射性同位素。FIA 分为异质和均质测定，这取决于是否需要分离步骤。这些测定可以以竞争性或非竞争性形式进行。

异构竞争FIA方法用于测定生物样品中的药物，例如氨基糖苷类抗生素、尿液中的苯甲酰爱康宁、人血清中的甲状腺素等。 

在抗体结合导致标记分析物的荧光特性发生某些变化的情况下，使用均相竞争 FIA 方法。该方法还用于直接从反应混合物中监测分析物的浓度。

4.化学发光免疫分析 (CLIA)

化学发光免疫分析是以化学发光物质作为标记物。通常，发光是电子从激发态跃迁到基态时发出的可见光或近可见光辐射。该技术因其检测限低、性能高和特异性好而越来越多地用于药物分析。

5.脂质体免疫分析 (LIA)

该免疫测定使用脂质体封装标记物。脂质体用于 LIA，与分析物或抗体偶联，然后进行正常的免疫测定过程。LIA 的检测取决于释放封装标记物的脂质体的裂解。这些测量的标记与分析物的浓度相关。 

6.毛细管电泳免疫分析 (CEIA)

毛细管电泳免疫分析是一种相对较新的技术，用于灵敏检测分析物。该技术基于毛细管电泳分离和异质免疫分析原理的结合。

CEIA 涉及抗体与作为固相免疫反应器的微毛细管的修饰内表面的共价结合。分析物的检测基于免疫测定。这种方法非常灵敏，能够检测皮摩尔水平的分析物。

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