动物细胞培养技术是生命科学研究中的重要工具，它为科学家们提供了一个体外模拟生物体内细胞生长和分裂的环境。通过动物细胞培养，研究人员可以深入研究细胞的生理功能、代谢途径以及疾病的发生机制，为人类的健康和福祉做出贡献。本文将介绍动物细胞培养的程序和方案。

1. 生长条件

动物细胞培养需要使用比微生物生长所用的基本培养基更复杂、更具体的特定培养基。培养基中重要的基本成分包括无机盐、氮源、能量源、维生素、脂肪及脂溶性维生素、生长因子、激素等，有时还会添加pH缓冲系统、抗生素等。生长的温度取决于细胞的来源，因为不同的生物体需要不同的温度来生长和分裂。温血动物细胞培养的最适温度为37℃，冷血动物的生长温度为15℃-25℃。

2. 原代细胞培养

原代细胞培养物是利用无菌剃刀从器官中取出的新鲜组织获得的。在某些情况下，使用化学分解剂或蛋白水解酶去除细胞间质。用缓冲液清洗获得的细胞悬浮液以去除蛋白水解酶。将细胞悬浮液倒入平坦的表面上，可以是培养容器或无菌培养皿。将能够粘附在容器底部的细胞覆盖在适当的培养基中并在室温下孵育。

3. 细胞解冻

在随后的传代培养中，可能必须使用保存的细胞培养物。将水浴加热至 37°C 的温度，并对要接种细胞的生长培养基进行加热。将温热的培养基加入培养容器中，然后将装有冷冻细胞的瓶子放入水浴中直至解冻。解冻后，用 70% 酒精清洗孔的外部。将细胞悬浮液移入细胞培养容器中，轻轻旋转以混合所有物质。然后将培养基在通常的生长条件下培养过夜。第二天更换生长培养基。

4. 胰蛋白酶化细胞

胰蛋白酶消化是利用蛋白水解酶将粘附细胞从培养容器表面分离的方法。当细胞要用于传代、计数或其他目的时，就会进行此操作。除去培养基，回收细胞，然后用磷酸盐缓冲液清洗细胞。将温热的胰蛋白酶-EDTA加入到容器中，以覆盖单层细胞。可以摇动容器以确保单层细胞被覆盖。将容器放入 37°C 的 CO2 培养箱中孵育1-3分钟。将容器从培养箱中取出，用手掌用力敲击烧瓶的侧面，以帮助分离。一旦细胞被移除，它们就会被重新悬浮在含有一定量血清的适当生长培养基中。然后借助注射器针头，通过破坏细胞团块来分离细胞，并进行相应使用。

 5. 传代培养

传代培养是指将原代培养的细胞从培养容器表面分离下来，重新接种在新的培养基中，使其继续生长和分裂的过程。传代培养是动物细胞培养中非常重要的一步，它使得研究人员能够获得大量的细胞用于后续的实验研究。

6. 细胞冻存

为了长期保存细胞，研究人员需要将细胞进行冻存。细胞冻存是将细胞置于特定的冻存液中，然后通过降温的方式使细胞进入休眠状态，从而在低温条件下长期保存细胞。冻存后的细胞可以在需要时进行解冻和复苏，继续进行培养和实验研究。

 7. 细胞分选和纯化

在动物细胞培养过程中，为了获得具有特定表型的细胞群体，研究人员需要进行细胞分选和纯化。细胞分选是通过特定的方法将细胞按照其表型或功能进行分离的过程。而细胞纯化则是将细胞分选后得到的细胞群体进一步纯化，以获得更纯净的细胞亚群。

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