苏州阿尔法生物实验器材有限公司

天根TIANScriptⅡcDNA试剂盒

适用范围:1. cDNA第一链的合成;

2. cDNA文库的构建;

3. 一步法RT-PCR;

4. RACE分析。

天根TIANScriptⅡcDNA试剂盒-qpcr试剂盒-逆转录试剂盒-KR107

产品简介:

本试剂盒提供了所有的用于cDNA第一链合成的试剂,其中的TIANScriptⅡRTase为改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV),改良后的新RTase具有更高的模板亲和力和更低的RNase H活性,因此使其在cDNA第一条链的合成过程中具有通读复杂二级结构模板和反转录长片段cDNA的能力。产品中配备的5×TIANScriptⅡRTase Buffer经过精心的优化,既保证了新型RTase的高效酶活,又拓宽了RNA模板量的加入范围,使得反转录出来的cDNA利于后续的实验分析。


产品特点:

■ 酶活效率高:效率高的反转录酶活性,后续实验兼容性好。

■ 底物范围广:适用于所有RNA,尤其是具有复杂二级结构的RNA 模板。

■ 反转片段长:cDNA 第一链合成可以达到12 kb。

■ 操作简单:只需一步添加所需成分,无需中间加入其他试剂。

天根TIANScriptⅡcDNA试剂盒适用范围:

1. cDNA第一链的合成;

2. cDNA文库的构建;

3. 一步法RT-PCR;

4. RACE分析。


实验步骤:

KR107操作步骤

注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行滤除菌处理。

2. RNA样品要避免基因组DNA污染;

3. 避免反复冻融RNA,使RNA保持在冰浴中处融化状态;

4. 试剂盒中各组分成分应在-20℃保存;

5. 在使用Random Primer时,要注意随机引物量和总RNA量之间的关系,一般建议50 ng随机引物/5 ug总RNA。当提高Random/RNA的比率将会提高短片段(~500 bp)cDNA的合成;而当降低Random/RNA的比率将会提高长片段cDNA的合成;

6. 如果模板RNA富含二级结构,可以先在65℃条件下处理5min;

7. 如果反转录中使用PCR下游引物,为了防止引物错配导致的非特异扩增,可以在50℃条件下进行反转录;

8. 在进行长片段扩增时,为了防止cDNA结果被破坏,建议以70℃下处理15 min为酶灭活条件;

9. 当使用酶类时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部,由于酶粘度高,吸取时应慢慢吸取。

注意:如果要扩增长片段,需使用新鲜提取所得的完整性好、纯度高的RNA

储存条件

本产品中的各成分可在-20℃条件下保存1年。

QPCR

 

 PCR