苏州阿尔法生物实验器材有限公司

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒产品性能稳定,可提高脂肪间充质干细胞成软骨诱导效率;同时适用于脂肪间充质干细胞平面诱导和三维诱导;该产品属于即用型产品,内含染色液,开封即可使用,简单、快捷、方便。

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒规格脂肪间充质干细胞诱导分化成软骨试剂

质检标准 pH:7.2~7.4 

内毒素含量:<10 EU/mL 

生物安全:细菌、真菌、支原体检测阴性 

质量检测:诱导测试合格

| 检验原理 

阿利辛蓝广泛用于酸性多糖的染色,如软骨 或组织中的糖胺聚糖和细胞分泌的外被多糖的 染色等。干细胞在诱导培养基的作用下,会逐渐 向软骨细胞方向分化。软骨细胞外具有一层富含 蛋白多糖的基质,是成软骨分化的标志物,可被 阿利辛蓝染成蓝绿色。


 脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒使用说明

 成软骨诱导分化操作(平面诱导) 

1. 细胞分化诱导 

将对数生长期的细胞消化下来计数,成软骨 诱导分化培养基诱导液重悬细胞,离心后调整细 胞密度密度1.0~2.0×10e7cells/mL。 吸取20 μL细胞悬液(约2.0~4.0×10e5个细胞) 悬滴至24孔板中央。置于37℃,5% CO2培养环境 下培养2~3 h使细胞贴壁。 2~3 h后补充1 mL成软骨诱导分化培养基诱 导液正常培养。每隔2~3天换液一次。按照以上 换液频率诱导21~28天,并注意观察细胞形态变 化。 

2. 染色鉴定 

2.1 细胞固定 吸去培养基使用适量 1×PBS 清洗一次,弃去 后取适量 4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室 温固定 30~60 min 后,弃去固定液再使用 1×PBS 清洗两次。

 2.2 阿利辛蓝染色 向清洗干净的诱导孔内加入适量染色液,避 光静置染色 30 min。 吸去阿利辛蓝染色液,用 1×PBS 清洗两次, 并加入适量 1×PBS 避免细胞干燥。

 2.3 诱导评估 显微镜下观察成软骨染色效果,并进行图像 采集和诱导评估。诱导成功时,软骨组织中的内 酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。


  成软骨诱导分化操作(三维培养)

 1. 干细胞的准备 

将对数生长期的细胞消化下来计数,取 3×10e5 个细胞转移到 15 mL 离心管中,250 g 离 心 4 min。 弃上清,加入 0.5 mL 成软骨诱导分化培养基 预混液,重悬细胞,150 g 离心 5 min。小心弃去 上清,加入 0.5 mL 成软骨诱导分化培养基诱导 液,重悬细胞,150 g 离心 5 min。 将 15 mL 离心管的管盖稍稍旋开,放置于 37℃,5% CO2培养环境下培养。

 2. 细胞分化诱导 

24 h 后观察细胞沉淀形变团聚的情况,如有 明显的变化,则小心轻柔地拨动管底,尝试让细 胞团脱离管底,全部浸润在诱导液中。 置于 37℃,5% CO2培养环境下培养约 21 天, 通常每 2 天更换一次新鲜配制的成软骨诱导分化 培养基诱导液。注意观察细胞团成球情况及表面 光滑度,决定终止细胞诱导的时间,并进行染色 鉴定。

 3. 染色鉴定 

3.1 软骨球固定 将软骨球从离心管中转移至 EP 管,并使用 1 ×PBS 清洗两次,最后置于适量的 4%中性甲醛溶 液中。

 3.2 石蜡包埋切片 软骨球经石蜡包埋后切片。 

3.3 阿利辛蓝染色 将石蜡切片脱蜡和脱水,使用阿利辛蓝染色 液染色 30 min,用自来水冲洗 2 min,蒸馏水冲 洗 1 次。 

3.4 诱导评估 显微镜下观察成软骨染色效果,并进行图像 采集和诱导评估。诱导成功时,软骨组织中的内 酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。 

脂肪间充质干细胞诱导成软骨

NOTE: 干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体 来源,培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。