悬浮细胞转染试剂-QuickShuttle-Superfast 快速转染试剂

QuickShuttle-Superfast 快速转染试剂

货号：KX0110043 

含量：0.8 ml 

用途：（1）用于大多数哺乳动物贴壁细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建（立传立转）； 

           （2）用于大多数哺乳动物悬浮细胞系的稳定细胞系构建。 

注意事项： 

1. 质粒 DNA：请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒 DNA。

 2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒素纯水配制，高压消毒或除菌过滤。

 3. 培养基：经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试，推荐使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。 

4. 以 24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒素质粒 DNA 用量为 1~2µg、转染试剂用量为 3~5µl， 请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。 

5. 对于大多数哺乳动物贴壁细胞系，立传立转要求使用生长旺盛的细胞，即细胞生长至 80-90%成片或 刚长满。若使用生长过老的细胞，将明显影响立传立转的效率。 

6. 本品不推荐用于贴壁性较差的贴壁细胞系，如各种 293 细胞等。 

7. 本品对大多数哺乳动物悬浮细胞系有一定转染效率，可用于稳定细胞系构建。 

使用方法 ：

1. 将悬浮细胞或新鲜消化的贴壁细胞接种到 24 孔细胞板中，每孔 1~2×105细胞，1ml 完全培养基。

备 注：可在生长旺盛的贴壁细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无需 18~24 小时的等候时间。

 2. 将 1~2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注：质粒 DNA 和转染试剂的 最适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范围。 

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，用加样器吸打混匀。

备注：转染复合物可直接加入含血清的 细胞培养基中进行转染。 

5. 将细胞板移至 37ºC/5% CO2 孵箱中进行培养。

备注：无需在转染后 4~6 小时补加血清或更换培养 基。

 6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

备注：对于一些转染效率高的 细胞系如 BHK-21 等，可在转染后 24 小时进行后续实验。