人CD4 磁珠分选试剂盒 51-01-0001

人CD4磁珠分选试剂盒根据人细胞表面CD4表达从新鲜或冷冻的外周血单个核细胞(PBMCs)、白细胞分离产物或单细胞悬液中分离CD4+细胞。超顺磁纳米微珠表面用抗人CD4单克隆抗体进行标记，形成磁性纳米颗粒。预先偶联到纳米珠上的CD4抗体可以与细胞表面表达CD4的靶细胞结合。细胞/珠混合悬浮液被加载到分选柱上，当使用分离缓冲液冲洗CD4细胞时，纳米珠标记的CD4+细胞被保留在柱内，并在清洗步骤中富集。去除磁场后，目标CD4+细胞可以很容易地从柱中洗脱。

基本信息

产品规格

货号                   名称                            规格               细胞量

51-01-0001S 人CD4+磁珠分选试剂盒 1mL      for up to 5 ×108 total cells

51-01-0001L 人CD4+磁珠分选试剂盒 2mL 1 mL    for up to 1 ×109 total   cells

产品应用从白细胞分离、PBMC或细胞培养中富集或去除CD4+ T细胞。分离的CD4+ T细胞可用于培养和扩增、流式细胞术、T细胞功能检测等。

保存方式

保存于2-8°C。不可冷冻储存。可稳定保存至标签上的有效期(EXP.)。产品形式：生物可降解基质包被纳米颗粒与抗cd4抗体提供的磷酸盐缓冲盐水(PBS)，含有人血清白蛋白(HSA)，pH7.0-7.4

操作步骤

1. 材料准备

 1.1 分选缓冲液（PBS溶液，pH 7.2，0.5%BSA and 2mM EDTA）

 1.2 缓冲液

 1.3 分离柱

 1.4 分选磁铁

 2. 样本制备

 当使用抗凝外周血时，应采用密度梯度离心法进行分离，并使用分离缓冲液洗涤以去除干扰因子。

 当使用冷冻的PBMC时，复苏冷冻的PBMC，然后继续执行本方案。当发现死亡细胞相当多时，应用密度梯度离心法去除死亡细胞，或在培养基中培养细胞过夜，然后继续执行本方案。

 相关辅助产品

货号               产品名                        规格

91-01-0001 人淋巴细胞分离液    200mL/瓶

91-01-0002 快速单个核细胞分离管    15mL/支，20支 /包，10包/箱

91-01-0003 快速单个核细胞分离管    50mL/支，10 支/包，10包/箱

详细操作步骤请参考对应的产品说明书。

 3. 磁性标记

 3.1 将所需数量的细胞转移到一个新的试管中。

 3.2 细胞计数.

 3.3 细胞悬液、300g、10min离心，弃上清。

 3.4 在每10⁷总细胞在80µL缓冲液中重悬单细胞悬液。

 注意：需要考虑死体积，如死体积已足80uL则不需要加缓冲液。

 3.5 每10⁷总细胞加入20µLCD4磁性微球。

 3.6 混匀细胞悬液和磁珠，在冰箱中孵育30分钟(2-8°C)。

 注意：如需要鉴定纯度、可在这个步骤完成以后进行鉴定抗体孵育。

 3.7 洗涤，每10⁷细胞加入1-2mL缓冲液清洗细胞，300×g离心10分钟。弃上清。

 3.8 使用分选缓冲液，重悬细胞悬液在500uL体系。

 4. 实验耗材分选柱准备

注：以SophMag® xL Columns细胞分选柱为例（货号：51-02-0009），其余规格分选柱所需试剂用量见产品说明书。

4.1 取一根全新的分选柱置于对应配套的磁铁中。

4.2 取1mL分选缓冲液缓慢加入分选柱中，润湿分选柱内部，期间避免气泡产生和进入分选柱内部，直至分选柱后一滴液体流出。

4.3 在分选柱下放置新的试管，取操作步骤3准备的细胞悬液，缓慢加入分选柱内，等待细胞悬液后一滴流出。

4.4 取操作步骤4.3细胞悬液的试管加入3mL分选缓冲液，并充分混匀，然后加入分选柱内，直至后一滴流出。

4.5 重复操作4.4操作3次。

4.6 后加入5mL分选缓冲液于分选柱内，取出分选柱使用分选柱配套的活塞推出分选柱内目的细胞于新的试管里面。

4.7 根据下游应用对应处理。如需鉴定纯度需尽快完成。