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 MTT 细胞增殖检测试剂盒 作为高灵敏度成本低廉的细胞增殖检测试剂,已经广泛应用于一些生物 活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等领域,它的特点是敏感度高、成本低廉。

MTT细胞增殖检测试剂盒

 MTT Cell Proliferation Assay 

MTT细胞增殖检测试剂盒


货号 规格 BDXB0004 100次 

保存:4℃避光保存,保质期1年 

 MTT Cell Proliferation Assay 产品概述

    MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,汉语化学 名为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染 料。 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢 (Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的 甲臢,用酶标仪在500-600nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成 的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)来判断活细胞数量,OD值越大,细胞 活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。

   MTT法已经广泛应用于一些生物 活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等领域,它的特点是敏感度高、成本低廉。它的缺点是需要使用有机溶剂,不仅是工作量增加, 也会对实验准确性产生影响。 

 MTT 细胞增殖检测试剂盒组成

 1. MTT试剂:10ml 

2. 甲臢溶解液:100ml 

需要自己准备的材料

 1. PBS(无菌)

 2. 细胞培养基(无菌)

 3. 96孔板(组织培养级,平底,无菌) 

4. 倒置显微镜 

5. 排枪 

6. 细胞CO2培养箱 

7. 酶标仪(含650、570nm滤光片)

 使用方法 

1. 根据实验目的取不同数量的细胞进行96孔板的铺板(参考值:细胞增殖实验每孔加入 100μl约2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μl约5000个细胞。如有可能,最好先做 预实验,确定细胞铺板的数量)。

 2. 待细胞贴壁、生长恢复后,按照实验需要,给予不同浓度的药物刺激等处理。

 3. 每孔加入10μl的MTT试剂。(如果细胞培养基体积大于100μl,按比例调整加入MTT试 剂的量)

 4. 37℃孵育2-4hr。间或用显微镜观察细胞内沉淀形成情况。

 5. 当显微镜下能看到明显的紫色结晶沉淀时,每孔加入100μl甲臢溶解液(包括对照孔)。 勿晃动。

 6. 室温(18-24℃)避光放置至少2hr(最长可以过夜)。如果读数偏低,并且紫色结晶溶 解不完全,可以继续放置。(通常室温放置就足够,但37℃有助于加速结晶的溶解)

 7. 去盖,将孔板放到酶标仪中,在570nm(或介于550-600nm间的任意波长)测定OD值, 参比波长650nm。

 MTT 细胞增殖检测试剂盒 注意事项 

1. 实验中必须设立阴性对照。 空白孔的OD值应该在0±0.1之间 未处理细胞的OD值通常应该在0.75-1.25之间

 2. 阳性对照也应该设

立。