HyCyte 人脂肪间充质干细胞
细胞简称：H ADSC
产品货号：ADHX-C106
种属来源：人
组织来源：脂肪
细胞形态：成纤维细胞样
生长特性：贴壁生长
培养基货号：ADHX-G102
传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次
传代周期：48-72 h
培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃
冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存
质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性
毒素检测：＜10 EU/mL
参考文献：
Bianco P, Robey P G,Simmons P J. Mesenchymal stem cells: revisiting history , concepts, and assays[J]. Cell Stem Cell, 2008,2(4):313
Bassi G, Pacelli L, Carusone R, et ai. Adipose-derived stromal cells(ASCs)[J]. Transfus Apher Sci, 2012,47(2):193
DelaRosa O, Sanchez-Correa B, Morgado S, et al. Human adipose derived stem cells impair natural killer cell function and exhibitlow susceptibility to natural killer mediated lysis[J]. Stem Cells Dev,2012,21(8):1333
Estes B T，Diekman B O,Gimble J M, et al. Isolation of adipose derived stem cells and their induction to a chondrogenic phenotype[J]. Nat Protoc,2010,5(7):1294
Bassi G,Pacelli L, Carusone R, et al. Adipose derived stromal cells (ASCs)[J].Transfus Apher Sci,2012,47(2): 193
货号：ADHX-C106
规格：1×10^6 cells/Vial |
收货后处理方法:
收到细胞后请检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损，并核对管身标签信息和数量， 确认是否与装箱单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。 如不立即进行实验，请将细胞放至-80℃或液氮中保存。
冻存代次： P2 培养体系： HyCyteTM成人脂肪间充质干细胞专用培养基（Cat. ADHX-G101）
换液时机： 发现有比较多的死细胞或培养基颜色较黄时，应换液。一般为每 2-3 天换液
传代比例： 一般为 1:2
传代周期： 细胞汇合度达 80%~90%时，可进行传代，一般为 48~72 h，不可让间充质干细 胞完全融合或过度融合，以免发生生长接触抑制，影响细胞的生长状态。
培养条件： 气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃
冻存条件： 使用一步冻存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）
1) 实验前开启水浴锅预热完全培养基。
2) 在工作台中准备好 15 mL 离心管加入 5 mL 预热后的完全培养基。
3) 从-80°C 冰箱中取出冻存管，将冻存管置于 37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融 化，同时需注意避免水面没过管口。
NOTE：建议将液氮中的细胞提前取出置于-80°C 待 液氮挥发后复苏。
4) 对冻存管外壁进行常规消毒后，在工作台内 小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次， 转移至 15 mL 离心管内。使用 1 mL 培养基 清洗冻存管内壁，一并收集至 15 mL 离心管 内。
5) 250 g 离心 5 min，收集细胞沉淀，弃掉上清 并加入 2 mL 完全培养基重悬（如有台盼蓝可 取少量进行染色计数）。
6) 将重悬后的细胞接种至 T25 或同等底面积器 皿，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀 分布。把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的 培养箱中培养。
7) 24h 后镜下拍照观察，换液后继续培养。如有 异常情况，请及时与我们联系。
| HyCyteTM H ADSCs 的传代
1) 预热 1×PBS、胰酶和完全培养基。
2) 吸去原培养基。用 1×PBS 洗涤细胞 2~3 次。
3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。轻轻旋转，使胰酶 覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察约 70%~80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养 器皿外壁使细胞脱壁。
4) 当观察到细胞明显脱落，立即加入预热的完 全培养基终止消化。用吸管吸取液体，反复轻 柔吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿 底壁。 NOTE：建议可添加 2 倍胰酶用量的完全培养基用于 终止消化。
5) 将细胞悬液转移到离心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集细胞悬液至离心管中。
6) 250 g 离心 5 min。
7) 小心弃去上清液，加入 1~2mL 完全培养基重 悬细胞。
8) 选择合适的培养器皿，加入适量完全培养基， 按照合适的传代比例（一般为 1:2）接种细胞， “划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
9) 把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养 箱中培养。
| HyCyte H ADSCs 的冻存
1) 待细胞生长至可传代的汇合度，即可消化准备 冻存。
2) 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经 250 g离心5 min。
3) 小心弃掉上清。用4°C预冷的冻存液重悬细胞， 一般冻存密度为1×10^6个/mL。
4) 对冻存管进行标识后，把细胞分装到冻存管中， 旋紧冻存管盖。
5) 如使用HyCyte使用一步冻存液，冻存管直接 竖直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序冻存液，需将冻存管放入程序降温 盒后方可放入-80°C冰箱。
6) 24小时后可将细胞转移到液氮进行长期保存。
