博奥龙-佐剂-弗氏佐剂-新型乳剂-抗体制备
博奥龙-佐剂-弗氏佐剂-新型乳剂-抗体制备 是一种新型油包
水佐剂,用于免疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、 多克隆抗体。
该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础,添加了多种具有强免疫刺激活性的TLR配体。
(1)
新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂;
(2)与
弗氏完全佐剂不同,不含有干扰免疫应答的无关蛋白成分;
(3)安全性好,副反应率低;
(4)免疫针次少、抗原用量低等多方面特点。
二、
博奥龙-佐剂-弗氏佐剂-新型乳剂-抗体制备 的使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制)。
备注:推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。
2. 用振荡器充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl)与抗原按体积比1:1混合,并用振荡器剧烈振荡5-10min,直至静止放置10min水油相不分层。
备注:与抗原混合前佐剂分层属正常现象,但必须充分混匀后才能取用。
3. 通过皮下或肌肉单点注射免疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快注射,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快注射;
(3)尽量选择引流淋巴结附近(如腋窝和腹股沟附近)的皮下或肌肉进行免疫。
4. 第21天按同样方式加强免疫1针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
5. 第35天采微量血进行 ELISA测定,
抗体滴度应在1:10000-1:10000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。
6. 若抗体滴度没有达到要求,可在第42天按同样方式加强免疫1针。
备注:通常情况下小鼠只需免疫2针,而家兔往往需要免疫3针。
7. 若免疫3针,可在第52-56天采微量血进行ELISA测定, 抗体滴度应在1:10000-1:1000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。
备注:佐剂免疫效果有时也与抗原特性有关,若免疫3针后仍达不到要求,不建议进行更多针次免疫。
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