3T3诱导分化试剂盒

3T3诱导分化试剂盒 产品性能稳定，可提高小鼠细胞成骨诱导效率；

 3T3诱导分化试剂盒使用说明 

1. 成脂诱导分化操作

 1.1 接种干细胞 取对数生长期的细胞， 按 照 2.0×10e4 cells/cm2 的细胞密度接种至培养器皿，于 37℃， 5% CO2培养环境下培养至汇合度 90~100%，弃掉 上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。 

NOTE：如细胞贴壁性较差，建议使用 0.1%明胶对培养底 面进行包被。

1.2 细胞分化诱导 于 37℃，5% CO2培养环境下培养约 3 天，更 换为成脂诱导分化培养基维持液，培养 1 天后， 再更换为成脂诱导分化培养基诱导液，继续培养 3 天。 按照以上换液频率诱导 14~21 天，并注意观 察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量 和大小，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色 鉴定。

 2. 染色鉴定

 2.1 细胞固定 吸去培养基使用适量 1×PBS 清洗一次，弃去 后取适量 4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室 温固定 30~60 min，弃去固定液再使用 1×PBS 清 洗两次。 

2.2 油红 O 染色 取生理盐水或1×PBS与油红O原液配制油红 O工作液（油红O原液: 生理盐水=3:2），现用现 配。配制后可对油红O工作液进行离心，以沉淀 染色液中的过饱和析出物。向清洗干净的诱导孔 内加入适量油红O工作液，静置染色30min。吸走 油红O工作液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1 ×PBS避免细胞干燥。

 2.3 诱导评估

 显微镜下观察成脂染色效果，并进行图像采 集和诱导评估。诱导成功时，脂滴与油红 O 染料 结合后呈现红色或橘红色。 NOTE: 干细胞的成脂分化水平因细胞类型、细胞供体来 源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。