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天根-无内毒素质粒小提中量试剂盒-DP118 提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、 PCR、测序、连接等实验。

DP118


天根-无内毒素质粒小提中量试剂 -DP118采用硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的溶 液P4和过滤柱CS,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1个小时,方便快 捷。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的 种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、 PCR、测序、连接等实验。 提取得率 质粒类型 菌液量 得率 质粒 低拷贝 5-15 ml 5-25 µg pBR322, pACYC及其衍生载体, pSC101 及其衍生载体, SuperCos, pWE15 高拷贝 5-15 ml 15-70 µg pTZ, pUC, pBS, pGM-T 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

储存条件

      本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于 2-8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要 时可在37℃水浴中预热10 min,以平衡溶液温度)。单独包装的RNaseA在室温可稳定保存 12个月以上。加入RNaseA后的溶液P1应置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。

 试剂盒使用注意事项

1.溶液P1在使用前 加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。

2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明 在漂洗液PW中加入无水乙醇。 3.使用前检查平衡液BL、溶液P2和P4是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加 热几分钟,即可恢复澄清。

4.注意不要直接接触溶液P2和P4,使用后应立即盖紧盖子。

5.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm (~13,400×g )。

 6.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或 大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、P4的用量,洗脱缓 冲液应在65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。

 7.实验前使用平衡液处理吸附柱,可以充分激活硅基质膜,提高得率。

 8.用平衡液处理过的柱子 好当天使用,放置时间过长会影响效果。


TIANGEN-天根无内毒素质粒小提中量试剂盒-操作步骤


注意事项:为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,重复步骤 13。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于100 μl,体积过小影响 回收效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。 质粒DNA浓度及纯度检测 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单 一条带,也可能为2到3条DNA条带,这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等 有关。OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA。 OD260/OD280比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值 会偏低,但并不表示纯度低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值。