天根-琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(增强型)(离心柱型) DP 219使用说明【点击进入下载中心】

储存条件

该 试 剂 盒 所 有 组 分 置 于 室 温 ( 1 5 - 3 0 ℃ ) 干 燥 条 件 下 ， 可 保 存 1 2 个 月 。 若 溶 液 产 生 沉

淀 ， 使 用 前 可 在 3 7 ℃ 水 浴 中 预 热 1 0 m i n 以 溶 解 沉 淀 ， 不 影 响 效 果 。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。  

1. 电泳时请使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

2. 如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。

3. 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

4. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

5. 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5,可向含有DNA的胶溶 液中加10-30μl3 M醋酸钠(pH5.2)将pH值调到5-7之间。

6. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。 

操 作 步 骤

使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 将单 一 的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管

中，称取重量。

注意：使用切胶器(OSE-GC)切胶时，切胶器口对准琼脂糖凝胶中的DNA条带下压切割。切胶完成后，推动中心杆，将胶块推入干净的离心管中。根据凝胶胶孔宽度可进行单次切割和连续切割。

2. 向胶块中加入3倍体积溶胶液PE(如果凝胶重为0.1 g,其体积可视为100 μl,则加入300 μ溶胶液PE。使用切胶器切割1%的琼脂糖凝胶，单块重量约为0.06 g,实际胶块重量与 凝胶浓度及厚度相关),室温15-25℃溶胶5-10 min,其间不断温和地上下翻转离心管，

以确保胶块充分溶解。 若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块)。  

注意：对于大于5 kb以上的大片段或者是胶浓度大于1.5%的情况下，建议50℃加热溶胶 5-10 min;胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。

3. 将上 一 步所得溶液加入 一个吸附柱CA5中(吸附柱放入收集管中),室温放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA5放入收集

管中。

注意：吸附柱容积为800 μl,若样品体积大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CA5中加入600 μl漂洗液PW 使用前请先检查是否已加入无水乙醇),  12,000

rpm(~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA5放入收集管中。

注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。

5. 重复操作步骤4。

6. 将吸附柱CA5放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,尽量除尽漂洗液。 将吸附柱CA5置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实 验 。

注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。